MicroRNA靶基因驗證

MicroRNA主要通過作用于靶基因的 3’UTR 起作用，可以通過相關軟件和網站進行靶點預測。預測到靶點之后，將目的基因 3’UTR 區(qū)域構建至psicheck2載體中，通過比較野生型UTR和突變體UTR載體中報告基因表達的改變（監(jiān)測螢光素酶活性的變化），可以定量反映 miRNA 對目的基因的結合作用，也即用熒光值來判斷miRNA是否和靶基因結合。

紐赫生物推出“MicroRNA靶基因驗證服務”，為客戶尋找或驗證microRNA的靶基因。

實驗流程如下：

1.    構建靶基因3’UTR報告載體、含突變靶點的3’UTR報告載體。

2.    將miRNA mimics、NC mimics與靶基因3’UTR報告質粒共轉染至293T工具細胞中。

3.    檢測熒光素酶活性，確定目的microRNA和目的基因之間的關系。

4.    構建含突變靶位點的熒光素酶報告基因載體。

5.    處理數(shù)據

圖1. psicheck2質粒圖譜，用于構建靶基因3’UTR報告載體、含突變靶點的3’UTR報告載體

圖2. 雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測mmu-miR-1a-3p與X-gene之間的相互作用

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