重組蛋白定制服務(wù)

(一) 基因設(shè)計(jì)及合成 
 

紐赫生物為客戶提供密碼子、GC含量和特殊基因序列的優(yōu)化等基因設(shè)計(jì)工作，能提高轉(zhuǎn)錄和翻譯效率，提高mRNA穩(wěn)定性。
 

(二) 載體構(gòu)建
 

紐赫生物有如pET21a（+），pET28a(+)、pGEX系列、pMAL系列等三十多種成熟原核表達(dá)載體、真核表達(dá)載體可供選擇，有十多種自主優(yōu)化構(gòu)建的特色載體，這些載體分別具有提高表達(dá)量、促進(jìn)分泌表達(dá)、促進(jìn)可溶表達(dá)、促進(jìn)二硫鍵形成等特征。并可針對(duì)目的蛋白性質(zhì)、制備工藝要求以及大腸桿菌系統(tǒng)的特點(diǎn)，優(yōu)化基因序列和載體構(gòu)建，以求得到最優(yōu)的表達(dá)系統(tǒng)等。在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)主要通過以下幾方面進(jìn)行優(yōu)化：

1）啟動(dòng)子的選擇：提供強(qiáng)啟動(dòng)子、中強(qiáng)啟動(dòng)子及弱啟動(dòng)子的選擇；
2）信號(hào)肽的選擇：提供多種不同分泌機(jī)制的信號(hào)肽供選擇，找到最優(yōu)的表達(dá)信號(hào)肽；
3）促表達(dá)伴侶分子的選擇：有多種促可溶表達(dá)分子伴侶、促二硫鍵形成分子伴侶、促折疊分子伴侶可供選擇；
4）純化標(biāo)簽的選擇：為方便純化制備，提供多種親和純化標(biāo)簽供選擇，如His標(biāo)簽、GST標(biāo)簽、MBP標(biāo)簽、Strep標(biāo)簽等。
 

(三) 表達(dá)菌株建立及小量誘導(dǎo)表達(dá)
 

紐赫生物主要從增強(qiáng)質(zhì)粒穩(wěn)定性、提高表達(dá)量、促進(jìn)含稀有密碼子基因的表達(dá)、提供胞內(nèi)蛋白二硫鍵形成環(huán)境、促進(jìn)毒性蛋白表達(dá)等方面進(jìn)行表達(dá)菌株的選擇，并進(jìn)行小量誘導(dǎo)表達(dá)和檢測。
 

(四) 重組蛋白大規(guī)模表達(dá)工藝優(yōu)化
 

紐赫生物可以為客戶提供3L、10L、50L等不同量級(jí)的蛋白發(fā)酵工藝的優(yōu)化，主要從培養(yǎng)方式、培養(yǎng)基配制、培養(yǎng)液pH、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間等多個(gè)角度入手，對(duì)重組蛋白的大規(guī)模表達(dá)工藝進(jìn)行優(yōu)化。
 

(五) 蛋白復(fù)性
 

紐赫生物綜合現(xiàn)有各類復(fù)性方法，優(yōu)化出若干類針對(duì)不同重組蛋白的方法，分別復(fù)性不同蛋白，達(dá)到使每種重組蛋白都獲得較高復(fù)性效率的目的。這些優(yōu)化的方面包括：

a）緩沖體系的選擇，包括緩沖鹽的種類和濃度、pH值等；
b）鹽離子種類和強(qiáng)度的選擇；
c）氧化還原對(duì)的選擇，這個(gè)需要參考重組蛋白的二硫鍵含量情況；
d）聚集抑制劑和復(fù)性促進(jìn)劑的選擇。有多種化學(xué)試劑可以用來抑制蛋白聚集和促進(jìn)復(fù)性，復(fù)性重組蛋白時(shí)可以針對(duì)性選用。
 

(六) 蛋白純化
 

紐赫生物建有完善的具備成熟的離子層析介質(zhì)、親和層析介質(zhì)制備經(jīng)驗(yàn)和產(chǎn)品，可以進(jìn)行多樣化的蛋白純化方法選擇和優(yōu)化。紐赫生物根據(jù)客戶需求，可為客戶制備出純度達(dá)到90%-99%重組蛋白。 

(七) 內(nèi)毒素控制與去除
 

系統(tǒng)表達(dá)的蛋白產(chǎn)品會(huì)夾帶大量內(nèi)毒素殘留，其主要來源為大腸桿菌細(xì)胞壁成分脂多糖。內(nèi)毒素因?yàn)槠浔旧懋愘|(zhì)性，分子大小不一、疏水性很強(qiáng)、帶很強(qiáng)負(fù)電荷，往往與目的蛋白結(jié)合在一起，極不易分開，所以去除起來很困難，迄今并無很好的方法。紐赫生物通過全流程控制和針對(duì)性去除相結(jié)合的方法控制殘留水平，最終將產(chǎn)品內(nèi)毒素水平控制在小于1EU/μg甚至小于0.1EU/μg。
 

(八) 蛋白鑒定
 

紐赫生物熟練掌握SDS-PAGE、蛋白濃度檢測、western blot、流式細(xì)胞術(shù)等定性或者定量分析的方法進(jìn)行重組蛋白鑒定。


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